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一.MLPA简介

MLPA®
高效灵敏的基因组和甲基化分析方法

         多重连接依赖探针扩增(Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification, MLPAÒ)能够在一个简单的反应内检测多达50个核酸序列的拷贝数变化,因此能够检测大量基因的缺失和重复,MLPA还可用于血液和肿瘤组织样品的DNA和mRNA谱的检测,并可分析甲基化。迄今,MLPA已经公认为一种可靠和有效的方法,自2002年首次报道以来,该技术已在全球的900多家实验室得以应用,使用该技术发表的论文已近千篇。

二.MLPA原理:基因捕获+PCR+毛细管电泳分离。

三.MLPA®的应用领域

  1. 小范围基因重组的检测:已检测的基因包括BRCA1, BRCA2, MSH2, MLH1, DMD, APC, SMA, NF1, NF2, VHL, TSC1/2, MECP2, NSD1, LDLR, FBN1, CFTR, DPYD, COL5A1, CACNA1A, PKHD1, BRIP1, SLC26A4, LMN1B, PRSS1, FRMD7, TPMT, FLCN, DNAI1, EP300, DNAH5, UBE3A, PCCA, PCDH15 等;
  2. 大范围基因重组的检测:已检测的疾病类型包括:Williams syndrome, Prader-Willi/ Angelman syndrome, DiGeorge syndrome, Cri du Chat, Pelizaeus-Merzbacher, CMT1, HNPP等;
  3. 亚端粒区域的拷贝数变化;
  4. 染色体非整倍体(包括羊水细胞样品);
  5. 肿瘤诊断:如ALL, CLL, oligodendrogliomas, melanomas, neuroblastomas的DNA拷贝数变化;
  6. 甲基化定量检测:涉及的疾病包括Prader-Willi/Angelman, Beckwith  Wiedemann, MGMT, MLH1, Fragile X 以及抑癌基因的失活。
  7. mRNA 分析:涉及细胞凋亡和炎症反应。
                                                                                                                                                                                                                                                                                                  目前MRC-Holland供应的SALSA® MLPA®试剂盒已多达400多个品种,而且通过与全球科学家的合作,新品种正在源源不断地开发出来。

四.MLPA技术和其他技术比较:

MLPA

普通PCR、Q-PCR

MMCA

测序

基因芯片

检测重数

单管多达50重

单重或少数几重

多种荧光标记,单管可达10-20重

全序列检测

重数灵活,可根据实际需要定。

通用性

需一台普通PCR仪及一台一代测序仪

一台对应PCR仪器

多种PCR仪均可用

需一代测序仪

一般需要专门仪器

技术优势

检测序列的拷贝数变化或已知点突变;可区分杂合缺失或重复

检测片段的缺失或图突变,方便自行设计

适合检测基因点突变;可区分纯合或杂合突变。

全序列测序;可检测已知/未知突变或缺失重复等

可检测基因缺失或点突变

技术劣势

不适合用于点突变检测

无法准确检测拷贝数变化。

无法准确检测拷贝数变化。

一代测序无法检测基因重复

无法检测基因重复及未知突变

准确性

体系内体系间对比,不会出现假阳性

定量实验影响因素多

有特异的Tm值,不会出现假阳性

金标准

判读时存在信号强弱无法区分的问题

五.MLPA数据分析

典型数据
    1. 正常:
2. 完全缺失:
3. 重复:
4. 杂合缺失 :
 
 

 

 
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